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2013/06/13

阿原微生物實驗室:抗生素抑制實驗之準備 --自己都很佩服自己

2013-06-13 貼出,本文版權沒有,照片部份,除了商品可能有疑慮,其餘也是版權沒有。

這學期大二的應用微生物實驗課,阿原準備的抗生素 (antibiotics) 的抑制實驗,採用紙錠擴散法 (paper disk diffusion method)。請看下方學生實驗的照片



如何,看起來學生做的不錯吧!

在您往向下看之前,請先深呼吸一口氣,因為這是阿原克服預算有限、沒有助教的情況下,完成實驗的準備。

阿原是在大二的微生物實驗課學到這個,這次阿原是以老師的身份進行實驗規劃與準備,自然是不同的心情。當然,阿原看了幾本中英文的實驗教科書,都是買現成的抗生素紙錠,但是這個不便宜,而且我們只需要一次實驗的量,一次買的量可能太多,萬一用不完,放到明年的課程,不敢保證抗生素還有效力。

最後,真的是壓力 (尤其是經濟與進度壓力) 使人成長,阿原就想到一個很簡單的辦法.......先不要急著往下看,請聽阿原慢慢道來。

阿原寫這篇的目的不是讓大家來嘲笑我們開南保營系的實驗經費缺乏 (是真的不多啦!),但是即使我拿到兩倍或三倍的經費,我還是會這樣做,因為多的錢可以準備更多的實驗讓學生練習,只要達到教學目的就好 (而且完全符合科學原理),我們不是在醫院進行抗藥性篩檢,所以不需要勉強自己花大錢去使用標準方法。

其實阿原從小就喜歡 DIY,其實會比一般同學多會一些 "鄙事",這樣的特色,在讀研究時,解決的不少問題。

這次阿原就想到.........(請往下看)


看完後不要佩服阿原,我真的發揮苦幹實幹的精神。












準備厚紙板 (兩面白) 與 打洞機

需要多少紙錠,請自己打洞。我還寫上編號 (A, B, C......)

就是這個,到西藥房買含單一抗生素的軟膏

鋁箔先殺菌,塗上藥膏,disk 的字面朝上,底面與軟膏接觸

將鋁箔包好,隔天的實驗每組發給一套的抗生素 disks



抑制微生物,除了原來就有的 E. coli (革蘭氏陰性菌) 及 Bacillus sp. 阿原還從市售的豆干的表面分離出四種菌 (未知,尚未進行菌種鑑定),取兩種來進行實驗。

而且請學生每種細菌多塗一個培養皿,不要放上任何 disk,作為 control。也就是萬一數種抗生素太強,以至於看不到 bacterial lawns, 這時候要看 control 是否正常生長 (若有生長,代表可能是抗生素太強或是有相乘作用)。萬一連 control 都沒有生長,就有可能是測驗菌種已經先死光了。所以設計 control  是很重要的!

就這樣,阿原當天示範實驗,隔天請同學使用阿原自製的燈箱來拍照及測量抑制圈 (clear zones) 的直徑。

這次使用四種單方軟膏,其抗生素及目標為

A. Neomycin (-and some +)
B. Fusidic acid (+)
C. Mupirocin (+)
D. Silver sulfadiazine (+ and -)

其中對各種菌抑制力最強的是 C Mupirocin ,連 E. coli 都可以抑制,真出乎意料。


不過也是有些有趣的插曲,例如下圖,中間沒有 paper disk 但是細尖的鑷子有碰到軟膏後,不小心碰到在 plate,就有 clear zone。



其實這次取用分離自豆干表面的菌種,一來配合法規,讓學生練習 MPN 法,檢測大腸桿菌數 (實驗已經完成,就等阿原寫到部落格) 也是希望可以找出可以抑制這些菌的乳酸菌,但是乳酸菌這邊的抑制實驗卻不順利,不然可以讓學生更完整操作 MPN 法 (不只是勞委會食品分析檢驗技術士,也侍衛管人員該會的方法),同時學會使用乳酸菌去控制汙染菌的概念。

再次說明,寫這篇文章不是要讓人家來向阿原吐口水 (如果有人用相同的預算與人力,可以做的比阿原好,我接受被吐口水),相反的,阿原要強調如何在有限的經費與人力,還能達到目的,才是創意與真功夫 (好吧,算我自誇),而且我也跟學生說明這些事情,錢多有錢多的作法,錢少,就靠創意把任務完成! 希望明年的實驗可以更順利。

說明:每種藥膏所含抗生素的濃度不同,加上軟膏這類的 "填充劑" 可能會正面或是負面影響抑制活性,因此看到抑制圈的大小,不代表是其抑制力的強弱 (而且擠軟膏無法精準定量), 因此阿原課堂上也強調這是概念實驗,真正在醫院的醫檢部有標準的作業方式,有興趣可以自行參考。